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請查收！您的全自動高通量蛋白純化方案已發(fā)布！

貝克曼庫爾特生命科學(xué) 2024-05-27 | 閱讀：690

在綠色生物制造和合成生物學(xué)等研究領(lǐng)域中，高質(zhì)量的蛋白分離和純化是研究目的蛋白結(jié)構(gòu)和功能的重要步驟。傳統(tǒng)的分離純化方法通量低、耗時長、均一性差，全自動高通量蛋白純化系統(tǒng)在生命科學(xué)研究和生物制藥領(lǐng)域已開始廣泛運用，從樣本前處理工序，到不同類型的蛋白純化流程，可實現(xiàn)多管線自動化平行實驗，具有穩(wěn)定的工藝流程，可極大提高實驗效率，節(jié)約時間和人力成本；同時還可以進(jìn)行數(shù)據(jù)交互，實現(xiàn)樣本溯源和實驗數(shù)據(jù)管理。今天小貝給大家整理了幾種常見好用的蛋白純化方案助力您的科學(xué)研究。

磁珠捕獲特異性標(biāo)簽蛋白，因其純化步驟精簡成熟被廣泛應(yīng)用，圖1是磁珠純化流程示意圖。小貝為您量身定制蛋白純化全流程自動化方案：使用Biomek i系列液體工作站，整合核酸/蛋白提取儀，實現(xiàn)高效高通量自動化蛋白純化，極大節(jié)省實驗時間和科研精力。

圖1 磁珠純化流程

圖2 Biomek i系列液體處理工作站展示圖

Biomek i系列液體工作站配置96通道和靈活8通道加樣器，適配各種商品化試劑盒和用戶自配試劑，輕松實現(xiàn)試劑分裝和高通量樣本純化。同時工作站支持多設(shè)備整合，可進(jìn)行后期無限升級，添加離心機(jī)、酶標(biāo)儀等設(shè)備助力全流程自動化實驗。

圖3 磁珠純化方法截圖及純化結(jié)果

高通量磁珠法蛋白純化模塊可以通過結(jié)合核酸/蛋白提取儀實現(xiàn)極簡快速蛋白純化，也可以通過自動化液體工作站結(jié)合磁力架完成。使用該功能時僅需要通過軟件的簡易命令行即可完成，如圖3所示，工作站機(jī)械抓手會根據(jù)純化流程將Binding Buffer、Beads、Washing Buffer等試劑自動搬運到指定位置，使用磁套進(jìn)行磁珠轉(zhuǎn)運，單次可以完成96個樣本純化，濃度穩(wěn)定在0.5-0.8mg/ml，96孔板純化時間約60min，節(jié)省槍頭成本，省時省力。

圖4 親和層析柱蛋白純化法實驗流程

RoboColumn是一種小型色譜柱，用于抗體、蛋白質(zhì)、多肽等的全自動平行色譜分離，其純化流程如圖4所示。高通量的RoboColumn ALP 與Biomek i系列液體工作站相結(jié)合，配置Span8固定針，可實現(xiàn)多通道自動化的平行層析實驗流程，顯著縮短工藝開發(fā)時間；同時還可以進(jìn)行數(shù)據(jù)追蹤，實現(xiàn)樣本溯源，減少重復(fù)工作。

圖5 RoboColumn ALP模塊結(jié)構(gòu)及Span8固定針示意圖

W1：廢液槽；B1：收集板載架；C1：柱載架

Biomek液體工作站可以實現(xiàn)臺面整合RoboColumn ALP模塊，通過軟件流程式編輯方法，控制ALP板位自動位移，實現(xiàn)液體收集，輕松完成蛋白純化，圖6展示了軟件控制ALP板位收集液體的方法以及RoboColumn純化結(jié)果，實驗中1.56mg蛋白上樣，經(jīng)0.1M Gly-HCl(pH2.7)洗脫回收得到蛋白含量1.31mg，純化得率達(dá)到84%，8通道操作時間約為80min。

圖6 調(diào)用RoboColumn方法界面及純化結(jié)果展示

圖7 PhyTip法自動化純化關(guān)鍵流程

PhyTip為槍頭式分散固相親和色譜柱，采用槍頭式裝置，純化樹脂被填充于槍頭尖端，由自動化液體處理工作站加載PhyTip，可以實現(xiàn)單通道到96通道靈活樣品數(shù)純化，其純化流程如圖7所示，可對微克級到毫克級的蛋白進(jìn)行純化。

圖8 PhyTip實物圖、PhyTip純化方法及結(jié)果展示圖

Biomek液體工作站與槍頭式純化色譜柱相結(jié)合，利用工作站加載PhyTip讓純化流程變得如移液流程一樣簡單！如圖8所示，加樣器加載PhyTip，分別在平衡液、蛋白樣品、洗雜液和洗脫液中混勻即可完成高通量蛋白純化，單次可處理96個樣品，收集10mL菌液使用PhyTip(40uL填料)，純化后經(jīng)BCA蛋白定量測定蛋白含量穩(wěn)定在400ug左右，優(yōu)于手工對照實驗340ug的結(jié)果，96孔板操作時間約為90min。

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