甲胎蛋白納米金側(cè)流免疫層析快速檢測試紙的研制

編號：NMJS02093

篇名：甲胎蛋白納米金側(cè)流免疫層析快速檢測試紙的研制

作者：方立超； 程平； 蔣麗莉； 黃輝； 李艷； 賀娟； 鄧均； 鄭峻松； 桂憶南； 楊聚；

關(guān)鍵詞：甲胎蛋白類； 納米金； 側(cè)流免疫； 試紙； 技術(shù)平臺；

機(jī)構(gòu)： 第三軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系暨藥學(xué)院臨床檢驗(yàn)學(xué)教研室； 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)員旅15隊(duì)；

摘要： 目的建立本教研室納米金側(cè)流免疫快速檢測試紙研發(fā)的技術(shù)平臺。方法通過檸檬酸三鈉還原法制備納米金顆粒。以免疫納米金(A520-A580)為縱坐標(biāo),相應(yīng)的金標(biāo)記參數(shù)(pH值、抗體量)為橫坐標(biāo)繪制曲線,曲線拐點(diǎn)為選擇參數(shù)。標(biāo)記緩沖體系的選擇主要依據(jù)標(biāo)記過程中納米金聚沉與否確定。根據(jù)免疫金的釋放程度和速度,選擇合適的硝酸纖維素膜和作為結(jié)合墊和樣品墊的玻璃纖維素膜、結(jié)合墊及樣品墊預(yù)處理液配方。依據(jù)點(diǎn)加抗體的硝酸纖維素膜和結(jié)合墊在不同條件下干燥后組裝試紙,免疫金的釋放程度和速度確定干燥條件。組裝試紙檢測臨床血清標(biāo)本,比較與ELISA檢測法的陽性符合率。結(jié)果成功制備了40 nm的納米金。甲胎蛋白(AFP)抗體Ⅰ最適標(biāo)記pH值為8.5,最適抗體標(biāo)記量為78 mg/mL納米金,標(biāo)記緩沖體系為pH值8.5 10mM Tris-HCl溶液。硝酸纖維素膜為whatman Immunopore RP,以玻璃纖維素膜Ahlstrom8964作為結(jié)合墊和樣品墊。結(jié)合墊選擇pH值8.5的處理液預(yù)處理,樣品墊選擇pH值9.5的處理液預(yù)處理。硝酸纖維素膜封閉洗滌后在26℃濕度26%條件下干燥1 h,結(jié)合墊在26℃濕度26%條件下干燥2 h。當(dāng)AFP含量大于10 ng/mL時,組裝試紙檢測臨床血清標(biāo)本的陽性檢出率與ELISA法符合率為100%。結(jié)論成功建立了本組納米金側(cè)流免疫快速檢測試紙研發(fā)的技術(shù)平臺,適用于病原微生物感染及腫瘤特異性標(biāo)志物的現(xiàn)場快速檢測。