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通過 SFC-50
對香豆素混合物進行分離純化
SFC應用
香豆素是一類具有廣泛生物活性的天然產物，它們在醫(yī)藥、香料、染料和分析領域都有廣泛的應用。香豆素及其衍生物因其抗腫瘤、降血壓、抗菌等多方面的活性以及良好的光學特性而受到關注。在醫(yī)藥領域，香豆素被用于治療多種疾病，如抗凝血藥物華法令和新雙香豆素。在香料領域，香豆素類衍生物用于洗滌劑、塑料制品等作為增香劑和定香劑。在染料領域，香豆素熒光染料因其高熒光效率和大的 Stokes 位移而受到重視。在分析領域，香豆素類熒光因其熒光量子產率高、Stokes 位移大、光穩(wěn)定性好等優(yōu)點，被用于熒光傳感器分子設計。
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簡介
香豆素混合物的分離挑戰(zhàn)主要為色譜柱的選擇：不同的色譜柱材料和粒徑會影響分離效果。選擇合適的色譜柱對于提高分離效率和分辨率至關重要。除此之外，傳統(tǒng)的液相色譜分離可能涉及大量有機溶劑的使用，這不僅增加了成本，還可能對環(huán)境造成影響。
本文提供一種通過超臨界流體色譜（SFC）對香豆素混合物進行分離純化的思路，快速篩選合適色譜柱的同時，由于采用大量 CO2 作為流動相，降低溶劑成本的同時也對環(huán)境保護做出貢獻。
2
實驗材料
▲ 香豆素 7（C-7）5mg：吡喃香豆素(角型)，一種通常存在于自然界中的激光染料，它的衍生物用于醫(yī)藥和化學，也可用作 OLED 的摻雜材料。
▲ 香豆素 334（C-334）5mg：吡喃香豆素(角型)，一種通常存在于自然界中的激光染料，合成半胱氨酸選擇性熒光探針或pH指示熒光探針的起始原料。
▲ 香豆素 4621（C-4621）50mg：自然界中發(fā)現(xiàn)的“簡單”香豆素，合成抗凝血劑、抗炎劑和抗氧化超氧化物清除劑的前體。
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實驗設備
Sepiatec SFC-50
色譜柱：
Dio,10x250mm,5um
Silica,10x250mm,5um
PEI,10x250mm,5um
C18 ,10x250mm,5um
CBD,10x250mm,5um
2-EP,10x250mm,5um
4
實驗條件
分別將樣品加載到 6 根不同色譜柱下，并在 20mL/min，柱溫箱 40℃；背壓 150bar 條件下運行，得到分離圖譜如下：
通過圖譜不難看出，三個香豆素類化合物在 2-EP 色譜柱中分離表現(xiàn)最好。之后通過對改性劑進行調整，通過優(yōu)化方法來改善分離度。
最終確認方法條件：
色譜柱：2-EP,10x250mm,5um
流速：20ml/min
柱溫：40℃
背壓：150bar
改性劑：15%甲醇等度洗脫
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結論
通過 Sepiatec SFC-50 快速篩選適合分離香豆素混合物的色譜柱與改性劑條件。15% 的甲醇用量相較于傳統(tǒng)色譜法，極大降低有機試劑使用成本，并為后續(xù)大量制備打下基礎。
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