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步琦 2024-06-18 | 閱讀：332

如何將 TLC 條件

成功轉(zhuǎn)化到 Flash 色譜上

色譜應(yīng)用

在進(jìn)行全面的 Flash 色譜之前，化學(xué)家通常會進(jìn)行薄層色譜(TLC)篩選。除了節(jié)省時間、溶劑和樣品外，用戶還可以使用他們的 TLC 數(shù)據(jù)為接下來的 Flash 色譜運(yùn)行找到更合適的參數(shù)。這篇文章強(qiáng)調(diào)了 TLC 結(jié)果如何轉(zhuǎn)化為優(yōu)化分離的理論，并展示了軟件如何將 TLC 數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為更好的純化條件。

假如平時愛好騎平衡車的你突然某一天想去嘗試自己從未涉獵的自行車時，并且很輕而易舉的就掌握了騎自行車的技巧，請你不要驚訝。這是因為你設(shè)法將平衡技能從簡單的無踏板自行車轉(zhuǎn)移到復(fù)雜的自行車上。

有趣的是，我們實驗室里的科學(xué)家也有類似的功能。我們通常從更簡單的實驗和方法開始，這些實驗和方法需要更少的資源，然后再轉(zhuǎn)移我們的知識并嘗試更復(fù)雜的技術(shù)。以薄層色譜（TLC）和 Flash 色譜為例。由于簡單、快速和樣品使用量少，許多 Flash 用戶更喜歡在純化前對樣品進(jìn)行 TLC 篩選。就像從平衡車到腳踏自行車一樣，人們可以使用從 TLC 實驗中獲得的信息進(jìn)行更具挑戰(zhàn)性的Flash色譜分析。

如何在自動化 Flash 色譜儀將 TLC 上的結(jié)果轉(zhuǎn)化成為有用的方法？

首先我們需要理解從 TLC 色譜上獲得的數(shù)據(jù)與待分離 Flash 色譜柱體積（CV）之間的關(guān)系。一個典型的 TLC 色譜分析如下：

▲ TLC 色譜示例，其中(a)表示溶劑前沿移動的距離，(b)表示分析物移動的距離

跑完 TLC 薄層色譜之后，需要計算每個分析物的保留因子（Rf），這個可以用一個簡單的公式表示：

保留因子（Rf）=分析物到原點(diǎn)的距離（b）/溶劑前沿到原點(diǎn)的距離（a）

其中：

R_f =1 表示在 TLC 上沒有保留(隨著溶劑前移)，

R_f=0 表示對溶劑沒有親和力(停留在起跑線上)。

使用薄層色譜開發(fā)的方法可轉(zhuǎn)移到 Flash 色譜，因為保留系數(shù)和柱體積之間的關(guān)系如下:

在實際應(yīng)用中，保留系數(shù)與柱體積的反比關(guān)系如下:

最佳 R_f 值范圍為 0.15 ~ 0.35,CV 值范圍為 2.8 ~ 6.7。

較小的 R_f 值導(dǎo)致很長的運(yùn)行時間和高溶劑消耗，而較大的 R_f 值導(dǎo)致較短的運(yùn)行時間，并有未完全分離的風(fēng)險，如下圖所示。

▲ 不同 R_f 和 CV 值下的 TLC 色譜和 Flash 色譜儀示例。(a)較小的 CV 值導(dǎo)致較短的運(yùn)行時間，這可能導(dǎo)致分離度不夠。(b) CV 范圍在 2.8 和 6.7 之間的結(jié)果是分辨率和運(yùn)行時間以及溶劑消耗之間的最佳平衡。(c)較大的 CV 值導(dǎo)致運(yùn)行時間長，溶劑消耗高。

這些理論考慮可以很容易地應(yīng)用于特定的方法開發(fā)軟件，例如 Navigator。該程序可以將 TLC 數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為優(yōu)化的 Flash 方法，以獲得最佳的分離和純化。

用戶只需要幾個簡單的步驟將他們的 TLC 結(jié)果轉(zhuǎn)移到軟件中，并為他們的 Flash 色譜過程確定最合適的參數(shù)。

首先，將 TLC 保留因子數(shù)據(jù)和色譜柱信息輸入軟件中，輸入使用的溶劑和 R_f 值，然后選擇色譜柱類型和相應(yīng)的流速。